Localisation et visualisation de transcrits fongiques in situ. Une méthode originale qui combine biologie moléculaire et microscopie confocale

Résumé

Les Gloméromycètes, formant la symbiose mycorhizienne à arbuscules, sont des champignons biotrophes obligatoires qui sont intimement associés aux tissus végétaux qu’ils colonisent. Les techniques utilisées pour suivre l’expression des gènes fongiques dans les racines mycorhizées ne permettent pas de définir le profil spatio-temporel de leur activité. Afin de tracer l’activité transcriptionnelle fongique dans les racines mycorhizées, une méthode innovante, basée sur la RT-PCR in situ, a donc été développée. Cette technique permet de localiser, en microscopie optique confocale à balayage laser, des transcrits fongiques, à l’aide d’amorces spécifiques marquées par un fluorochrome. Du fait de leur importance biologique et de la facilité de leur détection, nous avons choisi les gènes ribosomaux du champignon Glomus intraradices pour mettre au point la méthode dans son intégralité. Nous avons ensuite étendu avec succès cette méthode à d’autres gènes fongiques incluant certains gènes dont le niveau d’expression est faible. Cette technique ouvre la possibilité de mieux comprendre les interactions existant entre les champignons, symbiotiques ou pathogènes, et leurs partenaires végétaux.